DNS法测还原糖

DNS法，即3，5-二硝基水杨酸（3，5-dinitrosalicylic acid，DNS）比色法，是以比色法测还原糖的一种基本方法。还原糖的测定是糖含量测定的基本方法，测定方法有滴定法和比色法两大类。DNS法测还原糖以其检测浓度范围较宽，方法简便，便于还原糖大批量测定而得以普遍应用。^[1]

该法原理是在氢氧化钠存在下（碱性条件），还原糖与DNS共热后被氧化生成糖酸，DNS则被还原为氨基化合物（3-氨基-5-硝基水杨酸），在过量的碱性溶液中该化合物呈棕红色，在540nm波长处有最大吸收峰。在一定的浓度范围内，还原糖的量与吸光度值呈线性关系，故利用比色法可测定样品中还原糖的含量。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。^[1]

该测定法的实验步骤为制作标准曲线、定糖等。^[2]

DNS因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。

将6.3克3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L氢氧化钠，加到500ml含有182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml，即制成DNS试剂，贮于棕色瓶中放置一周后备用。

分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中，用蒸馏水补足至1.0ml, 分别准确加入DNS试剂2ml，沸水浴加热2min，流水冷却，用水补足到15ml刻度。在520nm波长下测定吸光度。

样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在520nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。