己糖激酶法

己糖激酶是六碳糖的磷酸化酶，催化使葡萄糖从稳定状态变为活跃状态，活化一个葡萄糖需要消耗1个ATP，一个ATP放出一个高能磷酸键，大约放出30.5kj自由能，大部分变为热量而散失，小部分使磷酸与葡萄糖结合生成葡萄糖-6-磷酸。

在己糖激酶催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G­­-6-PD)催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸内酯zhǐ，同时使NADP还原成NADPH。反应式如下：

根据反应方程式，NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比，在波长340nm监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。

在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷腺苷gān(adenosine triplcosphate，ATP)发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与二磷酸腺苷(adenosine driplcosphate，ADP)。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP)，同时使氧化型辅酶Ⅰ(NADP)还原成还原型辅酶Ⅰ(NADPH)反应式如下：

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根据反应方程式，NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比，NADPH在340 nm有特异吸收峰，在波长340 nm处监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。

酶馄合试剂的成分与浓度

根据试剂盒说明书复溶后，混合配制成酶试剂，置棕色瓶中放冰箱保存，约可稳定7天。

2．5mmol/L葡萄糖标准应用液

手工操作

1．速率法测定(以半自动分析仪为例)

(1)主要参数 (2)加样；预温酶混合试剂1000μ1，加血清20μ1，立即吸入自动分析仪，监测吸光度升高速率(△A/min)。

(3)计算

2．终点法测定：取试管，按下表编号进行操作。

以上各管充分混匀，在水浴，准确放置10min，分光光度计波长340nm、比色杯光径10mm，用蒸馏水调零，分别读取各管吸光度(Au、Ac、As、AB)。

计 算

参考值

空腹血清葡萄糖为3.89—6.1lmmol/L(70一110mg/dl)。

1．己糖激酶方法的特异性比葡萄糖氧化酶法高，是目前公认为测定血糖的参考方法，适用于自动分析仪。轻度溶血、脂血、黄疽jū、维生素C、氟化钠、肝京、EDTA和草酸盐等不干扰本法测定．因为从红细胞释放出的有机磷酸酯和一些酶能消耗NADP，故干扰本法测定。

2．虽然根据NADPH的摩尔吸光度可以直接计算血清葡萄糖浓度(如Boehringer、Roche等试剂盒)，但建议最好同时测定标准管和空白管(蒸馏水代替血清)。此时计算公式应为：