氢原子百科 
TRIzol试剂是一种含有异硫氰酸胍和酚的单相液，能迅破碎细胞并制细胞释放出的核酸酶。可从多种生物样品中分离高质量总RNA或同时分离RNA、DNA和蛋白。解耦联剂异硫氰酸胍是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白解离。酚裂解细胞，使细胞中的蛋白质和核酸解聚。酚还变性蛋白质，部分抑制RNA酶活性。[3][1]
组成与工作原理
Trizol试剂是一种含有水饱和酚，8-羟基喹啉、异硫氰酸胍，β-巯基乙醇等成分的混合物。其工作原理是首先通过苯酚、异硫氰酸胍裂解细胞，异硫氰酸胍它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用，使细胞中的RNA释放[4];8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等可以抑制RNA酶活性，保护RNA完整性。随后加入的氯仿则促使细胞裂解液分层,DNA、蛋白质与苯酚结合后存在于下层的氯仿有机相，而RNA存在与上层的水相，从而实现RNA的分离与提取。上层水相中的RNA，经过异丙醇与乙醇的多步沉淀与洗涤,去除盐杂质以及多余的水,得到纯化的RNA分子,最后使用琼脂糖凝胶电泳检测所提纯的总RNA浓度以及完整性用核酸测定仪进行精确定量。[2]
基本特点
综合性：Trizol试剂可以用于从细胞或组织中提取总RNA、DNA和蛋白质。它能够同时提取不同种类的核酸和蛋白质，使得研究人员可以在同一样本中获取多种生物分子信息。[3]
高效性：Trizol试剂采用酚-氯仿提取法，能够迅速破坏细胞膜，使得细胞内的核酸和蛋白质迅速释放出来。这种高效的提取方式可以获得高质量和高纯度的核酸和蛋白质样品。[3]
适用性广泛：Trizol试剂适用于多种生物样本，包括细胞培养物、动物组织、植物组织等。它能够应对不同来源和性质的样本，并提供一致的提取效果。[2]
方便易用：Trizol试剂操作简单，无需特殊设备或复杂的步骤。只需将样本与试剂混合，经过离心和沉淀步骤即可获得所需的核酸和蛋白质。[5]
可靠性：Trizol试剂具有良好的稳定性和可重复性，可以获得一致的提取结果。它已经在许多研究领域广泛应用，成为常规的核酸和蛋白质提取试剂。[5]
制备方法
除了购买成品TRIzol试剂，也可以自己配置TRIzol溶液。在的烧杯中加入25.77%的无RNase超纯水[注1]，然后依次加入22%的异硫氰酸胍、1.54%的柠檬酸钠溶液(pH≥7)，2.32%的十二烷基肌氨酸钠溶液(Sarcosy)，4.40%的醋酸钠溶液(pH≥4)，混合均匀，最后加入44%的重蒸苯酚，混合均匀。（注意：TRIzol需4℃低温保存，保质期约一年）。[7]
应用领域
TRIzol™试剂一般应用于实时荧光定量PCR(qPCR)，逆转录酶PCR(RT-PCR)，cDNA文库构建，核酸酶保护测定，Northern 印迹，克隆。[1]
TRIzol™试剂可很好地处理少量组织(50–100mg)和细胞(5×106)以及大量组织(≥1g)和细胞(>107)，且包含用于从人、动物、植物或细菌来源的样品中进行纯化的方案。TRIzol™试剂通过在样品均质化期间高效抑制RNase活性来维持RNA的完整性，同时破坏细胞并溶解细胞组分。TRIzol™试剂方法的简单性使其可同时处理大量样品。整个程序可在1小时内完成。通过TRIzol™试剂分离的总RNA不含蛋白和DNA污染。[1][2]
TRIzol™试剂可以连续沉淀单份样品中的RNA、DNA和蛋白。使用TRIzol™试剂均质化样品后，加入氯仿，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和红色下层有机层（含DNA和蛋白）。使用异丙醇从水层中沉淀出RNA。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚-乙醇上清液中沉淀出蛋白。洗涤沉淀出的RNA、DNA或蛋白以去除杂质，然后复溶以用于下游应用。[1][2]
危害健康
TRIzol对人体有害，使用时应戴一次性手套，注意防止溅出。如果接触到TRIzol试剂，需要立即使用大量去垢剂和水冲洗[3]。该试剂还含有酚类和疏基乙醇等成分，具有特殊气味，请于吸取试剂溶液后马上盖好瓶盖，或于通风橱中操作。[8]
储存事宜
请将TRIzol试剂储存于2~8℃，有效期为3年。[9][10]注意：不同生产厂家生产的TRIzol试剂会有不同要求，具体储存方法可以参考使用说明。
研发历史
TRIzol™试剂是以Chomczyński与Sacchi在1987年提出的一步分离RNA法为基础发明的。[11]Chomczynsk将此方法申请了专利。（专利号4,843,155/5,346,994）[12]
相关公司
参考资料 14
- TRIzol? 试剂 — 生命科技官网
- 参考 2
- 参考 3
- 参考 4
- 参考 5
- 参考 6
- 参考 7
- 参考 8
- TRIZoI试剂使用说明 — 杭州新景生物试剂开发有限公司
- TRIZoI试剂使用说明 — 天津三箭生物技术股份有限公司
- 参考 11
- US5346994A — 美国专利网站
- Life Technologies — 赛默飞官网
- TRI Reagent? RT (RT 111) — MRC官网
注释
- 成分由超纯水100mL，焦碳酸二乙酯(DEPC)50μL构成。[6]