体外转录

体外转录^[1]是一种在无细胞系统中模拟生物体内转录过程的技术。通过提供适当的条件，包括RNA转录酶、NTP等物质，以及将DNA作为模板，可以实现对特定基因的转录控制，以及转录后RNA的定制化用途^[2]。

为了确保体外转录^[3]的成功，转录模板需要满足以下条件：

1. 基因组全长克隆时，在正向引物5'端添加T7启动子序列。

2. 使用T7启动子作为体外转录的启动子，且在其后靶位序列为连续三个G时，转录效率最高。

3. 正向引物5'端添加一个帽子G，有助于提高体外转录RNA分子的侵染活性。

1. 模板DNA必须包含T7启动子位点，并且应为RNase-free级别。在质粒提取过程中，若使用了RNase，则必须通过苯酚·氯仿处理等方式去除RNase。